?近年來，CRISPR/Cas技術飛速發(fā)展，基于該技術發(fā)展的分子檢測方法具有快速、靈敏、特異、廉價等特性，已廣泛應用于生命科學領域，尤其在病原體檢測領域發(fā)展迅速。目前用于呼吸道病原體檢測的主要有CRISPR/Cas12和CRISPR/Cas13等系統(tǒng)。

CRISPR/Cas13檢測系統(tǒng)，張鋒等開發(fā)了一種基于CRISPR/Cas13的SHERLOCK技術，為SARS-CoV-2提供了快速準確的診斷方法。通過使用合成的SARS-CoV-2的RNA片段，設計并檢測了2個可識別SARS CoV-2特征的sgRNA，激活Cas13酶活性，切割報告分子，產生信號 。該技術最后需要將試紙條浸入反應體系中，通過辨識條帶位置的不同來確認是否感染SARS-CoV-2。

諾貝爾獎獲得者Doudna等報道了一種CRISPR/Cas13a和手機直接檢測新冠病毒的RNA的方法 ，這是一種簡便且便攜的檢測方法，實現從采樣到檢測的一體化。該裝置通用小型精簡的手機攝像頭進行熒光測試。此外，因為手機攝像頭具有高靈敏度、強連接性以及GPS和數據處理功能，所以這是一種可以應用到資源匱乏地區(qū)的實用工具，有助于即時檢測 。

在CRISPR/Cas12檢測系統(tǒng)，美國加州大學研究人員開發(fā)了一種基于CRISPR/Cas12的快速檢測SARS-CoV-2的方法，稱為DETECTR （DNA endonuclease targeted CRISPR trans reporter） 的病毒傳感器。該方法具有與qRT-PCR相當的準確性，具有無需加熱循環(huán)、快速、單核苷酸靶標特異性、無需復雜的實驗室設備等優(yōu)勢  。 

此外，復旦大學牽頭的研究團隊報道了一種基于CRISPR/Cas12的“多相復式非連續(xù)生產法”用于檢測SARS-CoV-2，俗稱“一鍋法” （opv CRISPR） ，是將逆轉錄環(huán)介導等溫擴增技術 （RT-LAMP） 及Cas12a剪切整合到一個反應體系中完成檢測 。在SARS-CoV-2潛在感染的臨床樣本的檢測中，用opv CRISPR方法得到的結果和中國疾病預防控制中心批準的RT-PCR的檢測結果達到100%的一致。這種“一鍋法”的形式，可以完全避免擴增子的污染，實驗操作步驟也被大大簡化，具有很好的臨床應用前景  。

雖然基于CRISPR/Cas的檢測技術發(fā)展迅速，但是仍然存在一些障礙和局限性需要研究解決，首先受到PAM序列特點的影響，sg RNA設計的靈活性有限，設計相對復雜；其次CRISPR/Cas 系統(tǒng)識別目標位點以外的其他位點，產生“脫靶”效應，導致檢測結果出現假陽性；因此，除了對現有CRISPR/Cas的診斷技術繼續(xù)優(yōu)化外，仍需發(fā)現、發(fā)展新型的CRISPR/Cas診斷系統(tǒng)，或與其他方法進行整合以提高應用的普適性，從而確保其具有良好的臨床適用性。